实时荧光定量PCR仪是分子生物学中一种强大的工具,其用于定量检测特定DNA或RNA分子的扩增过程的技术。实时荧光定量PCR仪则是执行这一技术的平台,它通过增加一个荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,实现了对PCR扩增过程的实时监控。在扩增时,引物利用同位素或荧光素进行标记,与荧光探针和模板特异性结合进行扩增。扩增信号通过实时采集系统输送到计算机进行分析处理,最终得出量化的实时结果。
实时荧光定量PCR仪的保养需从日常清洁、操作规范、环境管理、定期维护及预防污染五个方面入手,具体方法如下:
一、日常清洁与保养
仪器表面清洁
定期用软布蘸取少量清水擦拭仪器表面,清洗后擦干。
若试剂泄漏,需用70%酒精擦拭干净,避免腐蚀性液体接触仪器。
注意:清洁前必须关闭电源并拔掉电源线,禁止使用强腐蚀性或有机溶剂。
反应孔(样品孔)清洁
灰尘或杂质会影响PCR扩增和荧光检测,需每3个月清洁一次。
方法:用吹气球或洗耳球轻轻吹拭孔内灰尘;若孔内有荧光物质污染,可用移液枪吸取90%酒精浸泡20分钟,吸出酒精后自然风干或电吹风吹干。
防护:不使用时关闭滑盖,防止灰尘进入。
热盖清洁
热盖需用酒精或纯水定期擦拭,确保温控性能良好,避免影响反应温度均匀性。
二、操作规范与注意事项
开关机频率
避免频繁开关仪器,两次开关间隔时间不低于30秒。
实验结束后,保持待机状态10分钟(内部风扇持续工作),待模块温度降至室温后再关闭电源,防止热应力损伤。
电源与连接
使用原厂商提供的电源线和通讯线,避免与其他大功率设备共用插座,防止电压波动影响运行。
建议通过稳压器和UPS(不间断电源)连接电源,保护电路并确保试验结果稳定。
耗材使用
选用热密封性好的PCR管,避免侧壁和管盖带有记号笔标记(如需标记,仅限8联管两端),防止荧光信号干扰。
实验结束后及时取出PCR管,避免温度下降导致管盖冷缩,气溶胶溢出污染仪器。
三、环境管理
温湿度控制
环境温度建议18℃-35℃,湿度0-85%。温度过低可能导致检测无效(如0℃以下时阳性对照阴性)。
避免仪器暴露于潮湿、高温或腐蚀性气体环境中。
防尘与防干扰
仪器应放置在灰尘较少、远离水源和热源的地方,无强磁场干扰。
多台仪器同时使用时,保持间距≥50cm,降低相互影响。
四、定期维护与校准
软件更新与校准
定期检查制造商网站,下载并安装最新软件版本,修复漏洞并提升性能。
根据仪器型号,每半年至一年进行一次荧光校正(如ABI品牌仪器),确保数据准确性。
温控系统检查
定期验证温度控制的准确性和稳定性,若发现温度偏差(如各孔平均温度差>1-2℃),需联系专业人员调整或维修。
滤芯更换
根据使用频率,定期更换空气滤芯,防止灰尘进入仪器内部,延长电子元件寿命。