使用负80度低温冰箱进行样本保存的详细方法如下

更新时间：2025-09-25

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　　负80度低温冰箱，也被称为-80度冰箱或超低温冰箱，是一种极低温储存设备，可将物品存储在-80℃以下的温度下。其一般采用压缩机制冷技术，内部精密的控温系统可以控制温度。其保温材料使用先进的发泡材料，确保绝缘效果，降低能量损失。部分高型号如赛默飞-80度超低温冰箱，通过双级压缩机制冷系统实现极低温度的维持，确保冰箱内部温度的均匀性和稳定性。

　　使用负80度低温冰箱进行样本保存的详细方法：

　　一、样本准备与包装

　　选择合适的容器：

　　使用耐低温冻存管（cryovials），材质通常为聚丙烯（PP），可承受-196℃液氮温度。

　　常见规格：0.5 mL、1.5 mL、2.0 mL、5.0 mL，带螺口盖或旋盖。

　　确保冻存管密封性良好，防止“爆管”或交叉污染。

　　正确标记：

　　在冻存管侧面用耐低温记号笔或标签纸清晰标注样本信息（如名称、日期、浓度、操作者等）。

　　避免仅在管盖上标记，以防脱落。

　　建议使用条形码或二维码系统进行数字化管理。

　　添加保护剂（如需要）：

　　对于细胞、组织等活体样本，应加入冷冻保护剂（如10%DMSO或FBS），防止冰晶形成造成损伤。

　　蛋白质溶液可加入甘油（终浓度10-50%）以稳定结构。

　　分装保存：

　　将大体积样本分装成小份（如1 mL/管），避免反复冻融导致活性下降。

　　每次取用一份，减少其他样本暴露于高温的风险。

　　二、冻结过程（程序降温）

　　程序降温仪（推荐）：

　　使用专用程序降温仪，设定降温速率（通常为-1℃/min），从室温降至-80℃或直接降至液氮气相。

　　这是安全、有效的细胞冻存方法。

　　异丙醇冻存盒（替代方法）：

　　将冻存管放入装有异丙醇的冻存盒中，再置于-80℃冰箱。

　　异丙醇的比热容大，能实现约-1℃/min的降温速率。

　　优点：成本低；缺点：异丙醇需定期补充，降温速率受环境影响。

　　直接放入-80℃冰箱（不推荐用于细胞）：

　　仅适用于对冻融不敏感的生物分子（如DNA、部分酶溶液）。

　　细胞、组织等活体样本严禁直接放入，会导致大量死亡。

　　三、存放与管理

　　合理分区存放：

　　将冰箱内部分为不同区域（如按项目、样本类型、日期），使用冻存架、冻存盒进行分类。

　　避免杂乱堆放，便于查找和减少开门时间。

　　使用冻存盒：

　　将冻存管放入标准尺寸的冻存盒（如9×9格），盒外贴标签。

　　冻存盒可堆叠，提高空间利用率。

　　避免频繁开关门：

　　开门会导致温度剧烈波动（可达-40℃甚至更高），影响样本稳定性。

　　提前规划取样，快速操作，关门后等待恢复再开。

　　保持冰箱负载适中：

　　冰箱内样本不宜过满，留出空气循环空间，确保温度均匀。

　　也不宜过空，内部热容量小，温度波动大。可放置空盒子或乙醇瓶增加热惯性。

　　四、日常维护与监控

　　温度监控：

　　每日检查并记录冰箱显示温度。

　　使用独立的温度记录仪或远程监控系统，实时报警。

　　定期校准内置温度传感器。

　　定期除霜：

　　当蒸发器结霜过厚（>5mm）时，影响制冷效率。

　　按规程进行手动或自动除霜，转移样本至备用冰箱。

　　除霜后彻d干燥再重新启动。

　　清洁与消毒：

　　定期清洁内壁、搁架、密封条，使用75%酒精或温和消毒剂。

　　防止霉菌、细菌滋生和异味。

　　备份系统：

　　关键样本应建立异地备份（如另一台-80℃冰箱或液氮罐）。

　　冰箱配备断电报警、后备电池或备用制冷系统（如液氮补充）。

　　五、取用与复温

　　快速取用：

　　提前准备好工具（如镊子、冰盒），迅速取出所需样本，立即关门。

　　复温方法：

　　快速复温：将冻存管置于37℃水浴中轻轻摇动，1-2分钟内融化，避免慢速解冻损伤细胞。

　　融化后尽快进行后续操作（如离心去除DMSO、接种培养等）。